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    魔术三张牌顺移动: ALP染色

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    一、染色机制:

      碱性磷酸酶是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶,而是一组同功酶。已发现有 ALP1 、 ALP2 、 ALP3 、 ALP4 、 ALP5 与 ALP6 六种同功酶。其中第 1 、 2 、 6 种均来自肝脏,第 3 种来自骨细胞,第 4 种产生于胎盘及癌细胞,而第 5 种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。

      人血液和造血细胞的碱性磷酸酶pH值为9.4,主要见于中性粒细胞系的成熟阶段或晚幼粒细胞。在不同生理状态和病理状态中均有明显的改变,具有鉴别诊断意义。而本实验采用的钙钴法碱性磷酸酶染色(即改良Gomori法)原理为:细胞内碱性磷酸酶水解试剂中的甘油磷酸钠释放出无机磷酸盐,与钙离子作用生成磷酸钙,再与钴离子作用生成磷酸钴,最后与硫化铵生成黑色硫化钴颗粒,沉淀于细胞浆中。

    二、染色应用:

      临床上碱性磷酸酶染色法对以下疾病有鉴别意义:类白血病反应显著增高,慢性粒细胞白血病 (无继发感染) 显著减低;急性细菌感染伴白细胞增多时,积分显著升高,病毒性感染时多正常;真红细胞增多症积分升高,继发性红细胞增多者则正常,而阵发性血红蛋白尿症则减低;再生障碍性贫血患者明显升高,淋巴细胞白血病往往积分升高,但该病成熟的中性粒细胞较少,较难判断。

      碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。

    三、染色步骤:

      1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,水洗,蒸馏水洗三遍。

      2、工作液配制:β-甘油磷酸钠2.5ml,巴比妥钠2.5ml,氯化钙4.5ml,硫酸镁0.2ml,蒸馏水0.3ml依次混合。

      3、孵育染色:将工作液滴于组织切片上,切片放入湿盒中于37℃孵育4h,蒸馏水洗2遍,硝酸钴水溶液处理5min,蒸馏水洗3-5遍,硫化铵水溶液处理30s-1min,流水冲洗5min。

      4、苏木素染色:切片入苏木素染液染3-5min,自来水洗,分化液分化,自来水洗,返蓝液返蓝,流水冲洗。

      5、脱水封片:切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。

      6、显微镜镜检,图像采集分析。

    四、实验结果:

      肝细胞毛细胆管膜内,肾近曲小管的刷状缘,小肠上皮的纹状缘和肾上腺呈棕黑色至黑色,骨组织沿骨膜内整齐排列的矮柱状单核细胞呈棕黑色至黑色;细胞核浅蓝色。


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